| 日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究 |
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| 引用本文： | 李想,黄文树,黄贝,徐继松,翟少伟,梁英,张婉婷,刘海姿.日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究[J].海洋渔业,2019,41(5):567. |
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| 作者姓名： | 李想 黄文树 黄贝 徐继松 翟少伟 梁英 张婉婷 刘海姿 |
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| 作者单位： | 集美大学水产学院,福建厦门361021;福建省特种水产配合饲料重点实验室,福建福清350308;鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心,福建厦门361021;集美大学水产学院,福建厦门361021;鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心,福建厦门361021;集美大学水产学院,福建厦门,361021 |
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| 基金项目： | 福建省自然科学基金;现代农业产业技术体系建设专项;实验室开放基金;技术服务项目;福建省科技厅项目;国家级大学生创新创业训练计划项目;国家级大学生创新创业训练计划项目 |
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| 摘 要： | 分别以日本鳗鲡(Anguilla japonica)pMD19-T-IFNγ和pMD19-T-IFN-γrel重组克隆质粒为模板,采用PCR方法扩增日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因,而后分别将IFN-γ和IFN-γrel成熟肽的编码序列克隆至原核表达载体pQE30和pET32a上,成功构建了重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel。将重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel分别转化入Escherichia coli M15和Escherichia coli BL21感受态细胞进行表达,并优化IPTG诱导表达体系后用SDS-PAGE电泳鉴定IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白表达形式。IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果显示,重组表达载体pQE30-IFN-γ与pET32a-IFN-γrel分别在E.coli M15和E.coli BL21中得以正确表达。重组IFN-γ蛋白分子量为21 kD左右,表达的融合蛋白以可溶性形式存在;重组IFN-γrel蛋白分子量为31 kD左右,以包涵体形式存在。且两者均在1.0 mmol·L~(-1) IPTG诱导6 h时表达量最高。经镍柱纯化和Western blot检测,成功获得高纯度的IFN-γ和IFN-γrel重组蛋白。建立了日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因的原核表达系统,为进一步研究日本鳗鲡干扰素系统的功能及调控机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 日本鳗鲡 Ⅱ型干扰素 原核表达 |
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