利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼ifi30基因 |
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引用本文: | 曹顶臣,佟广香,吕伟华,孙志鹏,匡友谊,郑先虎,孙效文.利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼ifi30基因[J].水产学杂志,2016(6):26-30. |
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作者姓名: | 曹顶臣 佟广香 吕伟华 孙志鹏 匡友谊 郑先虎 孙效文 |
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作者单位: | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨,150070 |
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基金项目: | 中国水产科学研究院基本科研业务费(2016HY-ZD0301),农业部948项目(2016-X15) |
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摘 要: | 利用CRISPR/Cas9技术,在斑马鱼Danio rerio干扰素γ诱导蛋白30(ifi30)基因的第一个外显子处选取靶位点,用PCR法构建g RNA,并进行体外转录。将体外转录的sg RNA和Cas9m RNA显微注射到斑马鱼1细胞期的受精卵中,实现对靶基因ifi30的沉默。注射后24h检测发现,基因突变率在79%~95%之间,平均突变率为87.2%。为了获得稳定遗传的基因突变纯合系,将F_0代与野生型斑马鱼进行配组,获得了3种突变类型的F_1代,其突变率为30%。三种突变类型中突变1和突变2为移码突变,突变3删除了6个碱基,并未造成移码。突变1和突变2的F_1代杂合个体生长发育未见异常。将杂合F_1代自交,理论上将获得突变纯合个体,但仅在受精2h以内的胚胎中检测到了突变纯合个体,受精24h后的胚胎中,只有野生型和杂合型,未见突变纯合个体。推测ifi30基因的移码突变造成了干扰素γ诱导蛋白的缺失,导致胚胎死亡。
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关 键 词: | 斑马鱼 ifi30 CRISPR/Cas9技术 敲除 |
Knock Out of Interferon-gamma-inducible Gene 30 in Zebrafish by CRISPR/Cas9 |
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Abstract: | |
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Keywords: | zebrafish ifi30 CRISPR/Cas9 knock-out |
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