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| 黄带拟鲹qRT-PCR内参基因筛选及验证 | |
| 作者姓名： | 李杰锋 王焕 李步苏 曾祥辉 柳淑芳 庄志猛 |
| 作者单位： | 上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306；中国水产科学研究院黄海水产研究所 农业农村部 海洋渔业与可持续发展重点实验室 山东 青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所 农业农村部 海洋渔业与可持续发展重点实验室 山东 青岛 266071；海洋渔业科学与食物产出过程 功能实验室 山东 青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所 农业农村部 海洋渔业与可持续发展重点实验室 山东 青岛 266071；大连海洋大学水产与生命学院 辽宁 大连 116023 |
| 摘 要： | 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)是研究基因表达的一种广泛使用且有效的方法，选用黄带拟鲹(Pseudocaranx dentex)合适的内参基因，是qRT-PCR技术获得该物种基因表达可靠结果的关键。本研究首先测定了9个常用内参基因(β-actin、RPL13、EF-1α、GAPDH、HPRT、PPIA、β2M、TUB和PP2A)在黄带拟鲹成鱼组织中的表达丰度；同时，利用BestKeeper、NormFinder、geNorm和RefFinder 4种模型预测了内参基因的表达稳定性，发现其表达稳定性排序为RPL13 >EF-1α > PP2A >HPRT >PPIA >TUB >β2M >β-actin >GAPDH。进一步通过定量检测目标基因myod1在不同组织的表达情况，验证上述预测结果的准确性。研究发现，RPL13和EF-1α单独或联合作为黄带拟鲹qRT-PCR内参基因，可显著提高目标基因表达量检测结果的稳定性与可靠性。结果表明，RPL13和EF-1α可作为黄带拟鲹不同组织qRT-PCR分析的内参基因。同时，也证实了并不是管家基因的表达在所有物种中都具有良好的稳定性，需要根据实际情况筛选适宜的内参基因。本研究结果可为后续黄带拟鲹功能基因表达特征的研究提供技术支撑，有望适用于其他鲹科鱼类。 |
| 关 键 词： | 黄带拟鲹 qRT-PCR 内参基因 稳定性 |
| 收稿时间： | 2022/6/22 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/7/28 0:00:00 |
Screening and evaluating reference genes for quantitative real-time PCR in striped jack (Pseudocaranx dentex) |
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| Authors: | LI Jiefeng WANG Huan LI Busu ZENG Xianghui LIU Shufang ZHUANG Zhimeng |
| Institution: | College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Key Laboratory of Marine Fisheries and Sustainable Development, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Qingdao 266071, China;Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Key Laboratory of Marine Fisheries and Sustainable Development, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Qingdao 266071, China; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao 266071, China;Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Key Laboratory of Marine Fisheries and Sustainable Development, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Qingdao 266071, China; College of Fisheries and Life Science, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Pseudocaranx dentex qRT-PCR Reference gene Stability |
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