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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) gnrh2基因克隆、组织分布及卵巢成熟过程中表达分析
作者姓名:王 滨  柳学周  刘 权  赵 明  徐永江  史 宝
作者单位:1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 青岛266071;2. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071;上海海洋大学水产与生命学院 上海201306;3. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071
基金项目:国家自然科学基金项目(31602133; 31502145)、国家鲆鲽类产业技术体系(CARS-50)、山东省自然科学基金项目(ZR2016CB02)和中国水产科学研究院黄海水产研究所基本科研业务费
摘    要:为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析.结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untranslated region,UTR)为154 bp,3'UTR为126 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为258 bp,编码85个氨基酸的前体多肽,其分子量及等电点分别为9.69 kDa和8.55.GnRH2前体多肽由信号肽、GnRH2十肽、酶切位点(GKR)以及GnRH相关肽共4部分组成.序列比对分析发现,GnRH2在鱼类中同源性极高,尤其是十肽(QHWSHGWYPG)在所有硬骨鱼类中完全相同.半滑舌鳎GnRH2与鲈形目同源性最高(89.41%-90.5 9%),其次为鲽形目、鲑形目和鲍形目(78.82%-85.88%),与鲤形目同源性最低(61.18%-71.76%).gnrh2 mRNA主要在脑中表达,在垂体及其他外周组织中表达量极低.此外,组织学分析显示,半滑舌鳎卵巢发育共分为5个时期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期).在卵巢成熟过程中,脑gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成期(Ⅲ期)显著性增加,达到峰值;随后表达量急剧下降,在成熟期(Ⅴ期)达到最小值;在排卵后期(Ⅵ期)又显著性增加.然而,在卵巢成熟过程中,垂体gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成后期(Ⅳ期)显著性降低,随后在成熟期(Ⅴ期)有所增加,但在排卵后期(Ⅵ期)又急剧下降.上述研究结果表明,脑GnRH2可能参与了半滑舌鳎卵巢发育过程.

关 键 词:半滑舌鳎  促性腺激素释放激素2  基因克隆和表达  卵巢成熟
收稿时间:2016/8/16 0:00:00
修稿时间:2016/9/21 0:00:00

Molecular Cloning, Localization, and Expression Analysis of gnrh2 in Different Tissues of Half-Smooth Tongue Sole (Cynoglossus semilaevis) During Ovarian Maturation
Authors:WANG Bin  LIU Xuezhou  LIU Quan  ZHAO Ming  XU Yongjiang and SHI Bao
Abstract:
Keywords:Cynoglossus semilaevis  GnRH2  Gene cloning and expression  Ovarian maturation
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