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| 传染性造血器官坏死病毒糖蛋白抗血清的制备及应用 | |
| 作者姓名： | 朱旭 兰文升 刘荭 高隆英 杜鹃 陈孝煊 |
| 作者单位： | 1. 华中农业大学水产学院,武汉430070;深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心,518045;深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室,518045 2. 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心,518045;深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室,518045 3. 华中农业大学水产学院,武汉,430070 |
| 基金项目： | 国家质检公益性行业科研专项项目 |
| 摘 要： | 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH 5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白.经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57 kDa.Western-blot分析结果显示,所表达的蛋白能够被IHNV病毒制备的兔抗IHNV血清识别.用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,ELISA显示抗体效价可达1∶64 000.经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液的病毒粒子,将抗血清稀释到1∶16 000仍能与IHNV全病毒发生反应.本研究利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础. |
| 关 键 词： | 传染性造血器官坏死症病毒 糖蛋白 原核表达 抗血清 |
| 收稿时间： | 2012/2/25 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2012/4/6 0:00:00 |
Antiserum preparation for infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) glycoprotein and its application in IHNV detection |
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| Authors: | ZHU Xu LAN Wen-sheng LIU Hong GAO Long-ying DU Juan CHEN Xiao-xuan |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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