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| 基于鞭毛蛋白基因的坚强芽孢杆菌特异性套式PCR和荧光定量PCR方法的建立 | |
| 作者姓名： | 许彦芬 王海亮 陈大菾 宋晓玲 黄 倢 |
| 作者单位： | 1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛 266071; 上海海洋大学上海 201306 2. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛 266071 3. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛 266071; 青岛海洋科学与技术国家重点实验室青岛 266071 4. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛 266071; 上海海洋大学上海 201306; 青岛海洋科学与技术国家重点实验室青岛 266071 |
| 基金项目： | 公益性行业科研专项经费项目，现代农业产业技术体系，山东省泰山学者建设工程专项经费和农业部科研杰出人才和创新团队专项经费共同资助。 |
| 摘 要： | 细菌鞭毛蛋白编码基因hag具两端的保守序列及中间可变区域,在细菌的分类和鉴定中可作为分子标记。本研究克隆了坚强芽孢杆菌鞭毛蛋白编码基因hag部分序列,根据所得核酸序列设计套式引物Bfho和Bfhi,进行菌株的套式PCR特异性检测。此外,采用内引物Bfhi建立坚强芽孢杆菌荧光定量PCR特异性检测方法并确定该方法的检测限,对15个模拟样品进行检测并对阳性组中坚强芽孢杆菌的含量进行定量分析。结果显示,克隆得到的坚强芽孢杆菌hag基因长为1213 bp,经比对,与枯草芽孢杆菌hag基因相似性为13%-15%。荧光定量PCR方法对坚强芽孢杆菌菌株PC004和PC024的检测限分别为17.3×103和19.7×103 CFU/ml。模拟样品检测结果显示,15个样品中检测出7个阳性,并同时定量各样品中坚强芽孢杆菌的含量。本研究建立的坚强芽孢杆菌检测方法特异性强、操作时间短、灵敏度高,可为该菌的实际检测提供技术支持。 |
| 关 键 词： | 坚强芽孢杆菌 鞭毛蛋白 hag基因 套式PCR 荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2014/5/4 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/6/24 0:00:00 |
Establishment of Specific Detection Methods by Nested PCR and qPCR for Bacillus firmus Based on the hag Gene |
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| Authors: | XU Yanfen WANG Hailiang CHEN Datian SONG Xiaoling HUANG Jie |
| Institution: | XU Yanfen;WANG Hailiang;CHEN Datian;SONG Xiaoling;HUANG Jie;Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences;Shanghai Ocean University;National Laboratory for Marine Science and Technology; |
| Abstract: | |
| Keywords: | Bacillus firmus Flagellin hag gene Nested PCR Fluorescent quantitative PCR |
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