| 草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定及其对肝细胞miR-122/33和免疫相关基因表达的影响 |
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| 引用本文： | 卢荣华,张文雅,张玉茹,杨丽萍,王俊丽,孟晓林,聂国兴.草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定及其对肝细胞miR-122/33和免疫相关基因表达的影响[J].水产学报,2020,44(1):1-10. |
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| 作者姓名： | 卢荣华 张文雅 张玉茹 杨丽萍 王俊丽 孟晓林 聂国兴 |
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| 作者单位： | 河南师范大学水产学院,河南新乡 453007;河南师范大学生命科学学院,河南新乡 453007 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31402311，31672671，31872581)；NSFC-河南联合基金(U1704109)；河南省重点科技攻关项目(国家科技合作领域)(182102410031)；河南省自然科学基金(162300410165) |
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| 摘 要： | 外泌体是具有磷脂双分子膜结构的纳米级囊泡,能够参与机体多种生理过程。实验探讨了草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定方法,并初步研究外泌体对草鱼肝细胞中miRNAs及免疫相关基因表达的影响。实验以草鱼肝细胞L8824为材料,通过超速离心获得外泌体,利用电子显微镜观察外泌体形态,采用纳米颗粒示踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体粒径和数量,同时利用Western blot分析其标志蛋白CD63的表达,最后用正常肝细胞和油酸诱导的脂肪肝细胞源外泌体孵育草鱼肝细胞,通过Real-time qPCR技术检测两种不同来源的外泌体对草鱼肝细胞中miR-122/33及免疫相关基因(TNF-α,NF-κB,IL-1β,IL-6和IL-10)转录水平的影响。结果显示,草鱼肝细胞外泌体为30~150 nm的不均匀囊泡,呈圆形或椭圆形,有完整的膜结构;外泌体标志蛋白CD63呈阳性表达;NTA技术检测显示外泌体囊泡占所有囊泡的50%以上;脂肪肝细胞源外泌体显著提高了肝细胞中miR-122及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA转录水平。研究表明,通过超速离心法可成功分离草鱼肝细胞外泌体,且脂肪肝细胞源外泌体在草鱼肝细胞免疫调节中可能发挥重要作用。
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| 关 键 词： | 草鱼 肝细胞 外泌体 分离 鉴定 免疫调节 |
| 收稿时间： | 2018/12/14 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2019/4/26 0:00:00 |
Isolation and identification of hepatocellular exosomes and their effects on the expression of miR-122/33 and immune-related genes in grass carp(Ctenopharyngodon idella) |
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| LU Ronghu,ZHANG Weny,ZHANG Yuru,YANG Liping,WANG Junli,MENG Xiaolin and NIE Guoxing.Isolation and identification of hepatocellular exosomes and their effects on the expression of miR-122/33 and immune-related genes in grass carp(Ctenopharyngodon idella)[J].Journal of Fisheries of China,2020,44(1):1-10. |
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| Authors: | LU Ronghu ZHANG Weny ZHANG Yuru YANG Liping WANG Junli MENG Xiaolin and NIE Guoxing |
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| Institution: | College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China,College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China,College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China,College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China,College of Life Sciences, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China,College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China and College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ctenopharyngodon idella hepatocytes exosomes isolation identification immunoregulation |
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