| 日本沼虾C型凝集素结构域家族3的cDNA克隆、原核表达和定位分析 |
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| 引用本文： | 孙盛明,傅洪拓,宣富君,戈贤平,朱健,吴旭干.日本沼虾C型凝集素结构域家族3的cDNA克隆、原核表达和定位分析[J].水产学报,2019,43(11):2317-2326. |
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| 作者姓名： | 孙盛明 傅洪拓 宣富君 戈贤平 朱健 吴旭干 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081,中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081,盐城师范学院, 江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室, 江苏 盐城 224051,中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081,中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081,上海海洋大学, 水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室, 上海 201306 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31402280，31672633）；上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室开放课题（2016KF-02） |
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| 摘 要： | C型凝集素(C-type lectin)是一类能与糖类结合的非抗体的蛋白质或糖蛋白家族,为了研究C型凝集素基因在日本沼虾组织分布、细胞定位和细菌感染过程中的表达情况,本研究应用cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了日本沼虾C型凝集素结构域家族3基因(MnLec3)的全长序列,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析MnLec3基因在不同组织、细菌感染后不同时间的表达水平,Western blot和免疫荧光分别分析蛋白的表达水平和细胞定位。结果显示,MnLec3基因cDNA全长1 357 bp,包括125 bp的5′末端非翻译区(UTR)、1 026 bp的开放阅读框(ORF)和206 bp的3′UTR,其中开放阅读框编码341个氨基酸。氨基酸序列比对显示,日本沼虾MnLec3基因含有保守钙结合点(Met 1-Glu17)和糖识别结构域(CRD)。同源性分析结果显示,MnLec3与罗氏沼虾C型凝集素3相似度较高;邻接法(Neighbor-Joining,NJ)进化树分析结果显示,MnLec3与其他甲壳动物C型凝集素聚为一支。通过构建原核表达载体获得体外重组蛋白rMnLec3,并将纯化重组蛋白免疫大鼠获得抗血清,免疫荧光结果显示,绿色荧光信号主要在肝胰腺细胞核中表达。qRT-PCR结果显示,MnLec3在日本沼虾所检测组织中均表达,其中肝胰腺中表达量最高,血细胞次之;与对照组相比,在嗜水气单胞菌刺激12～48 h时MnLec3表达量显著升高,48 h表达量最高,Western blot分析结果显示,MnLec3蛋白表达丰度与基因表达模式基本相似,提示克隆得到的MnLec3参与日本沼虾抵御细菌入侵的免疫过程。
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| 关 键 词： | 日本沼虾 C型凝集素结构域家族3 嗜水气单胞菌 基因表达 |
| 收稿时间： | 2018/6/15 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/12/4 0:00:00 |
Molecular cloning, prokaryotic expression and localization analysis of C-type lectin 3 (MnLec3) cDNA from Macrobrachium nipponense |
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| SUN Shengming,FU Hongtuo,XUAN Fujun,GE Xianping,ZHU Jian and WU Xugan.Molecular cloning, prokaryotic expression and localization analysis of C-type lectin 3 (MnLec3) cDNA from Macrobrachium nipponense[J].Journal of Fisheries of China,2019,43(11):2317-2326. |
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| Authors: | SUN Shengming FU Hongtuo XUAN Fujun GE Xianping ZHU Jian and WU Xugan |
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| Institution: | Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Wuxi 214081, China,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Wuxi 214081, China,Jiangsu Provincial Key Laboratory of Coastal Wetland Bioresources and Environmental Protection,Yancheng Teachers University, Yancheng 224051, China,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Wuxi 214081, China,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Wuxi 214081, China and Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources,Ministry of Education Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Macrobrachium nipponense C-type lectins 3 Aeromonas hydrophilia gene expression |
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