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磁珠富集法分离草鱼微卫星分子标记
引用本文:孙效文.磁珠富集法分离草鱼微卫星分子标记[J].水产学报,2005,29(4):482-486.
作者姓名:孙效文
作者单位:1. 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江,哈尔滨,150070
2. 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江,哈尔滨,150070;大连水产学院生命科学与技术学院,辽宁,大连,116023
基金项目:国家重大基础研究资助项目(2004CB117405)
摘    要:磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过该方法分离草鱼的微卫星分子标记。将草鱼(Ctenopharyngodon idella)基因组DNA经Sau3AI酶切,同收纯化400~900bp片段,连上接头,构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列(CA)15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,经一系列的洗涤过程,去除磁珠表面不含有微卫星的片段。将吸附在磁珠上的片段洗脱,PCR扩增放大,再进行克隆和测序,根据微卫星两端的保守序列设计引物,即可得到微卫星分子标记。本研究义通过同位素标记的探针(CA)15进行二次杂交筛选,获得阳性克隆132个,所得到的阳性克隆经测序,86.36%含有微卫星序列,共获得130个微卫星DNA序列。用引物设计软件Primer Premier5.0没计引物83对。

关 键 词:磁珠富集  草鱼  微卫星分子标记
文章编号:1000-0615(2005)04-0482-05
收稿时间:2004-06-22
修稿时间:2004年6月22日

Isolation of microsatellite with enrichment by magnetic beads in grass carp, Ctenopharyngodon idella
SUN Xiao-wen.Isolation of microsatellite with enrichment by magnetic beads in grass carp, Ctenopharyngodon idella[J].Journal of Fisheries of China,2005,29(4):482-486.
Authors:SUN Xiao-wen
Institution:Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fisheries Science, Harbin 150070, China
Abstract:
Keywords:enrichment by magnetic beads  Ctenopharyngodon idella  microsatellite
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录!
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