| 星突江鲽生长激素基因的克隆及体外重组表达分析 |
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| 引用本文： | 臧坤,柳学周,徐永江,张凯,史宝,史学营,李存玉.星突江鲽生长激素基因的克隆及体外重组表达分析[J].水产学报,2014,38(9):1230-1242. |
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| 作者姓名： | 臧坤 柳学周 徐永江 张凯 史宝 史学营 李存玉 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071;上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071;青岛贝宝海洋科技有限公司, 山东 青岛 266000;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071;上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室, 山东 青岛 266071;上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306 |
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| 基金项目： | 国家“八六三”高技术研究发展计划（2012AA10A413）；鲆鲽类现代产业技术体系专项（CARS-50）；山东省自然科学基金项目（ZR2012CQ025） |
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| 摘 要： | 利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得星突江鲽生长激素基因(GH)的cDNA序列全长为957 bp,其中开放阅读框(ORF)长615 bp,编码204个氨基酸,氨基酸序列与牙鲆同源性最高达到73.0%,系统进化显示,星突江鲽GH与其他鲽形目和鲈形目鱼类聚为一个分支。采用实时荧光定量PCR技术对GH基因的组织表达特性进行了分析,结果显示,GH基因mRNA主要在雌雄成鱼垂体中表达,同时在脑、性腺、肝脏、胃和肌肉中均检测到表达,雌鱼胃和肌肉中GH基因mRNA的表达量显著高于雄鱼(P0.05),表明星突江鲽GH可能主要通过旁分泌和自分泌方式参与性别二态性生长调节。本实验成功构建了体外重组表达质粒GH/pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导可得N端含6个组氨酸的重组蛋白。重组蛋白主要以大小为24.9 ku的包涵体形式存在,Western-blotting免疫印迹呈阳性。包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后可得纯化GH蛋白;5.4和16.2μg/mL重组蛋白添加组中,人胚胎肾细胞HEK293T的增殖受到显著抑制。本研究结果可在分子和蛋白水平解析星突江鲽的生长调控机制。
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| 关 键 词： | 星突江鲽 生长激素 基因克隆 组织表达 原核表达 |
| 收稿时间： | 2014/6/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 7/8/2014 12:00:00 AM |
Molecular cloning and in vitro expression of growth hormone gene from Platichthys stellatus |
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| ZANG Kun,LIU Xuezhou,XU Yongjiang,ZHANG Kai,SHI Bao,SHI Xueying and LI Cunyu.Molecular cloning and in vitro expression of growth hormone gene from Platichthys stellatus[J].Journal of Fisheries of China,2014,38(9):1230-1242. |
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| Authors: | ZANG Kun LIU Xuezhou XU Yongjiang ZHANG Kai SHI Bao SHI Xueying and LI Cunyu |
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| Institution: | Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Qingdao BeiBao Marine Science and Technology Co., Ltd., Qingdao 266000, China;Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Platichthys stellatus growth hormone gene cloning tissue expression prokaryotic expression |
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