| 半滑舌鳎食欲素B的体外重组制备与生物活性分析 |
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| 引用本文： | 徐永江,李斌,柳学周,张凯,史宝,王滨,宋雪松.半滑舌鳎食欲素B的体外重组制备与生物活性分析[J].水产学报,2017,41(9):1374-1382. |
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| 作者姓名： | 徐永江 李斌 柳学周 张凯 史宝 王滨 宋雪松 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266237,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266237,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266237,青岛贝宝海洋科技有限公司, 山东 青岛 266400,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266237,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266237,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东 青岛 266071;青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 山东 青岛 266237 |
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| 基金项目： | 国家鲆鲽类产业技术体系专项（CARS-50）；国家自然科学基金（31502145） |
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| 摘 要： | 为了认识食欲素(orexin)编码的多肽orexin B对半滑舌鳎摄食的调控作用及机制,利用原核表达载体p ET-32a成功构建了重组半滑舌鳎orexin B/pET-32a质粒,转化至大肠杆菌BL21后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸分子标签的orexin B重组蛋白。重组蛋白大小为21.14 ku,在温度37°C条件下以1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h的orexin B重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的43.5%,并主要分泌于上清液中。Western blotting免疫印迹表明,获得的orexin B重组蛋白可被6×His抗体特异性识别。Ni~(2+)-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎orexin B重组蛋白。离体孵育实验表明,orexin B重组蛋白能促进下丘脑神经肽Y(NPY肽)的分泌和NPY,orexin mRNA的表达,表明获得的重组蛋白在激素和基因水平上调控下丘脑摄食相关神经肽的表达,具有明显的生物活性。研究结果可为半滑舌鳎orexin B蛋白的批量制备及高效促食生物制剂的研制提供技术支撑。
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| 关 键 词： | 半滑舌鳎 Orexin B 原核表达 生物活性 |
| 收稿时间： | 2016/8/8 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/2/23 0:00:00 |
In vitro recombinant expression and bioactivity analysis of orexin B from Cynoglossus semilaevis |
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| XU Yongjiang,LI Bin,LIU Xuezhou,ZHANG Kai,SHI Bao,WANG Bin and SONG Xuesong.In vitro recombinant expression and bioactivity analysis of orexin B from Cynoglossus semilaevis[J].Journal of Fisheries of China,2017,41(9):1374-1382. |
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| Authors: | XU Yongjiang LI Bin LIU Xuezhou ZHANG Kai SHI Bao WANG Bin and SONG Xuesong |
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| Institution: | Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China,Qingdao Beibao Marine Science and Technology Co. Ltd., Qingdao 266400, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China and Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266237, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cynoglossus semilaevi orexin B prokaryotic expression bioactivity analysis |
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