| 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因克隆、表达及DNA疫苗的免疫效果 |
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| 引用本文： | 黄浦江,黄郁葱,简纪常,吴灶和,鲁义善,张雪利.哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因克隆、表达及DNA疫苗的免疫效果[J].水产学报,2013,37(12):1839-1847. |
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| 作者姓名： | 黄浦江 黄郁葱 简纪常 吴灶和 鲁义善 张雪利 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学,广东海洋大学,广东海洋大学,仲恺农业工程学院,广东海洋大学,广东海洋大学 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑项目(2012BAD17B02)；国家自然科学基金项目(41240041)；广东省科技厅国际合作项目(2012B050600029) |
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| 摘 要： | 参照GeneBank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因序列,设计引物扩增OmpW的开放阅读框,序列分析结果显示该基因全长645 bp,编码214个氨基酸。将其定向克隆到原核表达载体pET-32a( ),在大肠杆菌BL21中成功表达出带His-tag的融合蛋白,融合蛋白分子量约为43.8 ku,且主要以包涵体形式存在。优化的表达条件为温度37 ℃,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导时间5 h。将纯化的融合蛋白免疫SPF昆明小鼠制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价达1:30,000,Western-blot结果表明鼠抗OmpW血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应,提示OmpW可能是哈维氏弧菌的一种重要保护性抗原。为了进一步研究哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护效果,构建了真核表达重组质粒pCDNA-OmpW,然后将真核质粒免疫接种红笛鲷。PCR结果显示,免疫接种第7、28 d,在红笛鲷的肌肉、头肾、肝脏和脾脏组织均存在质粒分布；RT-PCR结果显示,免疫接种第7、28 d,红笛鲷不同组织均有目的基因的表达。ELISA结果表明,红笛鲷体内血清产生了抗OmpW蛋白的高效价抗体。Western- blot分析表明,DNA疫苗免疫后红笛鲷体内表达了相应的目的蛋白,并诱导产生了相应抗体。攻毒试验结果表明,免疫保护率高达60 %,可见pCDNA-OmpW可作为红笛鲷预防哈氏弧菌感染的有效候选疫苗之一。
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| 关 键 词： | 哈维氏弧菌 外膜蛋白 OmpW 免疫原性 DNA疫苗 |
| 收稿时间： | 2013/7/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/9/23 0:00:00 |
Cloning,expression and DNA vaccine analysis of OmpW of Vibrio harveyi ZJ 0607 |
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| HUANG Pujiang,HUANG Yucong,JIAN Jichang,WU Zaohe,LU Yishan and ZHANG Xueli.Cloning,expression and DNA vaccine analysis of OmpW of Vibrio harveyi ZJ 0607[J].Journal of Fisheries of China,2013,37(12):1839-1847. |
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| Authors: | HUANG Pujiang HUANG Yucong JIAN Jichang WU Zaohe LU Yishan and ZHANG Xueli |
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| Institution: | College of Fishery,Guangdong Ocean University,Zhanjiang,College of Fishery,Guangdong Ocean University,Zhanjiang,College of Fishery,Guangdong Ocean University,Zhanjiang,Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals,Zhanjiang,College of Fishery,Guangdong Ocean University,Zhanjiang,College of Fishery,Guangdong Ocean University,Zhanjiang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio harveyi OmpW immunogenicity DNA vaccine |
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