鰤鱼诺卡氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 |
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引用本文: | 王国良,刘璐,李思源.鰤鱼诺卡氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].水产学报,2012,36(4):509-513. |
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作者姓名: | 王国良 刘璐 李思源 |
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作者单位: | 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 |
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基金项目: | 长江学者和创新团队发展计划(IRT0734); 农业部公益性行业科研专项(200903029); 浙江省自然科学基金(Y3080244) |
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摘 要: | 根据GenBank中蛳鱼诺卡氏菌16S-23S rRNA基因序列设计并合成一对特异性引物,经反应体系优化后建立了检测蛳鱼诺卡氏菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,标准曲线的相关系数为0.998;溶解曲线分析显示产物为单一的特异峰;检测灵敏度可达10 6μg/μL的DNA含量,与嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、麦氏弧菌不发生交叉反应,具有良好的特异性。应用建立的方法在蛳鱼诺卡氏菌病爆发时期,对16份鱼体组织、养殖水体、饲料等样品进行了检测,结果 7份为阳性,与细菌分离、培养检查结果 100%相符。既能检测发病鱼,又能检出未发病且已感染的病鱼,对病害的早期防控体现应用价值。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量等优点,可用于蛳鱼类致病鱼诺卡氏菌的快速检测。
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关 键 词: | 蛳鱼诺卡氏菌 SYBR-GreenⅠ 实时荧光定量PCR |
收稿时间: | 2011/7/11 0:00:00 |
修稿时间: | 2011/11/2 0:00:00 |
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