| 团头鲂转录因子Nanog的原核表达及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 于淼,方健,李玲玉,薛亭,陈天圣. 团头鲂转录因子Nanog的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 水产学报, 2017, 41(11): 1649-1659 |
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| 作者姓名： | 于淼 方健 李玲玉 薛亭 陈天圣 |
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| 作者单位： | 华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 湖北 武汉 430070;河南师范大学水产学院, 河南省水产动物养殖工程技术研究中心, 河南 新乡 453007,华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 湖北 武汉 430070,华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 湖北 武汉 430070,华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 湖北 武汉 430070,华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 湖北 武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究计划（2013CB967700）；华中农业大学科技自主创新基金（2013RC014，2662015PY049）；河南省自然科学基金（102300410104）；河南师范大学青年科学基金（2013qk15）；河南省水产养殖重点学科资助 |
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| 摘 要： | 为深入研究鱼类干细胞多能性转录因子Nanog的功能,本实验进行了团头鲂Nanog基因的原核表达和多克隆抗体的制备。首先,从团头鲂卵巢克隆出Nanog基因的编码区,将其连接到p ET32a载体上构建原核表达载体。接着将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得预期大小的Nanog重组蛋白,并获得大量蛋白以制备抗体。最后通过ELISA检测抗体的效价和采用Western blot技术检测Nanog抗体的特异性。结果显示,在37°C,0.5 mmol/L IPTG诱导4 h可获得Nanog重组蛋白的高效表达;制备的多克隆抗体能够有效识别原核表达的Nanog蛋白及团头鲂肝脏和精巢的内源Nanog蛋白;该抗体也可应用于检测HepG2细胞中过表达的团头鲂Nanog蛋白。本研究为蛋白的原核表达和特异性抗体的制备及验证提供了研究思路,也为研究鱼类Nanog基因功能提供了特异性抗体。
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| 关 键 词： | 团头鲂 Nanog 原核表达 多克隆抗体 干细胞 |
| 收稿时间： | 2016-09-15 |
| 修稿时间： | 2016-12-26 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Nanog protein in Megalobrama amblycephala |
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| YU Miao,FANG Jian,LI Lingyu,XUE Ting and CHEN Tiansheng. Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Nanog protein in Megalobrama amblycephala[J]. Journal of Fisheries of China, 2017, 41(11): 1649-1659 |
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| Authors: | YU Miao FANG Jian LI Lingyu XUE Ting CHEN Tiansheng |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding, Ministry of Agriculture, College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;Engineering Technology Research Center of Henan Province for Aquatic Animal Cultivation, College of Fishery, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding, Ministry of Agriculture, College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding, Ministry of Agriculture, College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding, Ministry of Agriculture, College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China and Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding, Ministry of Agriculture, College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Megalobrama amblycephala Nanog prokaryotic expression polyclonal antibody stem cell |
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