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| 鲈PPARγ基因的克隆、组织表达及其抗体制备 | |
| 引用本文： | 钱云霞,杨孙孝,梁洪,钱伦,钱凯先.鲈PPARγ基因的克隆、组织表达及其抗体制备[J].水产学报,2010,34(8):1156-1164. |
| 作者姓名： | 钱云霞 杨孙孝 梁洪 钱伦 钱凯先 |
| 作者单位： | 1. 浙江大学生命科学学院,浙江杭州,310058;宁波大学生命科学与生物技术学院,浙江宁波,315211 2. 宁波大学生命科学与生物技术学院,浙江宁波,315211 3. 浙江大学生命科学学院,浙江杭州,310058 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30671608);浙江省自然科学基金项目(M303345);宁波市自然科学基金项目(2006A610088) |
| 摘 要： | 根据GenBank上其他物种的PPARγ基因序列设计兼并引物,从鲈肝脏cDNA中扩增得到鲈PPARγ基因cDNA序列1 588 bp,分析表明该基因的开放阅读框为1 569 bp,编码522个氨基酸,理论等电点6.06,分子量59.02 ku。将鲈PPARγ氨基酸序列比对后发现与欧洲鲈同源性最高,为93.1%;与金头鲷的同源性为92.3%,与人同源性也达到为61.8%。用RT-PCR分析该基因组织表达模式,结果表明,鲈PPARγ主要分布于肝脏、鳃和脂肪组织。将鲈PPARγ开放阅读框1 569 bp序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)构成pET-28a-PPARγ1569重组体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度1 mmol/L的IPTG对其进行诱导表达4 h,SDS-PAGE电泳分析表明,pET-28a-PPARγ1569菌株在66 ku 处有1条特异的蛋白带,Western-blotting 检测表明该蛋白为鲈PPARγ融合蛋白。用镍离子亲和柱纯化的鲈PPARγ融合蛋白免疫小鼠得到其多克隆抗体。用间接ELISA法检测鲈PPARγ抗体的抗体效价约为1∶16 000。实验结果为进一步研究鲈PPARγ蛋白的生物学特性及功能奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 鲈 过氧化物酶体增殖剂激活受体γ 组织表达 抗体 |
| 收稿时间： | 5/6/2010 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 6/4/2010 12:00:00 AM |
Gene cloning,tissue expression and preparation of monoclonal antibody of Lateolabrax japonicus PPARγ |
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| QIAN Yun-xi,YANG Sun-xiao,LIANG Hong,QIAN Lun and QIAN Kai-xian.Gene cloning,tissue expression and preparation of monoclonal antibody of Lateolabrax japonicus PPARγ[J].Journal of Fisheries of China,2010,34(8):1156-1164. | |
| Authors: | QIAN Yun-xi YANG Sun-xiao LIANG Hong QIAN Lun and QIAN Kai-xian |
| Institution: | Ningbo University |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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