| 实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数 |
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| 引用本文： | 付立霞,高雯,韩先干,高波,张晓君,刘晓丹,曾令兵.实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数[J].淡水渔业,2018(4). |
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| 作者姓名： | 付立霞 高雯 韩先干 高波 张晓君 刘晓丹 曾令兵 |
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| 作者单位： | 农业部淡水生物多样性保护重点实验室中国水产科学研究院长江水产研究所;江苏省人畜共患病学重点实验室扬州大学动物科学与技术学院;中国农业科学院上海兽医研究所 |
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| 摘 要： | 为测定爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数,并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响,分别采用试剂盒和水煮法制备爱德华氏菌基因组,通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数,同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率。结果显示,以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和p EI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63±0.30、5.04±0.18和4.22±0.15、5.13±0.50,显著低于以水煮法测得的pEI1和p EI2拷贝数的绝对定量11.84±0.80、11.70±0.25和相对定量13.85±1.64、11.90±0.97。回收率结果显示,试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8±4.1)%,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1±0.5)%和pEI2的回收率(31.3±1.7)%。结果表明:通过实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时,基因组的制备以水煮法为宜,爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒。
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