山药染色体制片技术的优化

山药(Dioscorea opposite Thunb.)为药食兼用的常见蔬菜,而其染色体的研究相对滞后。以根尖为试验材料,分别考察不同的取材方式、预处理试剂、预处理方法以及解离方式对山药染色体制片效果的影响,筛选优化制片的关键技术,以期为今后细胞学研究打下基础。结果表明:室内基质培养块茎(或零余子)的方式获取的根尖中中期分裂相个数最多,且染色体分散良好的中期分裂相占的比例最高;适合于山药核型分析的预处理试剂为8-羟基喹啉同秋水仙素的混合液、8-羟基喹啉溶液,其中8-羟基喹啉溶液预处理后染色体缢痕更清晰,为最好的预处理试剂;预处理方法以低温4℃下2 mmol/L的8-羟基喹啉预处理2 h最好;采用酸解加酶解的方式解离效果明显好于单用酸解的方式,并且得到的制片中染色体形态清晰,96.3%的中期细胞的染色体分布于同一个水平面上。