葡萄白粉病菌潜伏侵染量Real-time PCR检测方法建立

根据葡萄EF1-α基因序列设计引物F-g-6/R-g-6，根据葡萄白粉菌细胞色素P450基因序列设计特异性引物F-P450-Un/R-Un，分别建立葡萄叶片和葡萄白粉菌的real-time PCR检测方法，用于计算分子病情指数。结果表明：使用real-time PCR方法对酿酒葡萄‘赤霞珠’叶片DNA和葡萄白粉菌DNA测定的灵敏度分别为10^-2和10^-5 ng·μL^-1，分别是常规PCR的100倍和1 000倍。同时建立葡萄叶片DNA和白粉菌DNA各自的标准曲线，标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，相关系数分别为0.99637和0.99564。利用建立的real-time PCR检测方法对葡萄尚未发病的30个田间样品进行检测，共检测到22个样品中含有葡萄白粉菌，其分子病情指数与18d后的田间病情指数极显著相关(相关系数为0.916)。建立的葡萄白粉菌潜伏侵染量real-timePCR分子检测体系，能够为葡萄白粉病的早期诊断和监测预警提供理论支持。