杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因PbCBL2的克隆和功能初探

 类钙调磷酸酶B亚基蛋白（Calcineurin B-like protein，CBLs）是植物中一类重要的钙离子传感器，参与调控植物生长发育及逆境胁迫响应过程。为了探明杜梨CBLs家族成员PbCBL2的序列特征和表达模式，以杜梨（Pyrus betulaefolia Bunge）幼苗为试材，运用EST搜索结合RACE技术、染色体步移法对PbCBL2的cDNA、DNA和启动子进行克隆，采用半定量RT-PCR和原核表达研究该基因在非生物胁迫下的表达模式。结果表明，PbCBL2基因cDNA序列长681 bp，编码一个含有226个氨基酸残基的蛋白。基因组DNA序列长1 927 bp，包括8个外显子和7个内含子，启动子序列包含光反应元件、厌氧诱导必需顺式作用元件、赤霉素反应元件和水杨酸响应顺式作用元件。PbCBL2编码的多肽具有植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白结合Ca²⁺所必需的4个EF手型结构和1个典型的植物钙调磷酸酶A亚基结合位点。未经处理的杜梨幼苗（对照）根和叶中未检测到PbCBL2的表达，PbCBL2的表达受NaCl、PEG6000、甘露醇和ABA诱导上调。PbCBL2转入大肠杆菌BL21（DE3）后，能够明显减轻NaCl、甘露醇和PEG6000对该菌株的生长抑制。PbCBL2基因具备植物CBLs基因家族的固有特征，对盐碱、干旱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应，大肠杆菌转入该基因后能够提高对盐胁迫和渗透胁迫的耐受能力。

Isolation of a Calcineurin B-like Protein Gene PbCBL2 from Pyrus betulaefolia and Preliminary Study of Gene Function