| 罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 邢爱佳,马小军,莫长明,潘丽梅,韦鹏霄,唐春风,唐其.罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达[J].园艺学报,2013,40(6):1195. |
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| 作者姓名： | 邢爱佳 马小军 莫长明 潘丽梅 韦鹏霄 唐春风 唐其 |
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| 作者单位： | （1广西大学农学院，南宁 530004；2中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193；3广西壮族自治区药用植物园，南宁 530023；4广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，南宁 530023） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，国家‘十二五’科技支撑计划项目，广西自然科学基金项目，广西卫生厅中医药科技专项项目，广西研究生科研创新项目 |
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| 摘 要： | 从罗汉果（Siraitia grosvenorii）转录组中获得一条与罗汉果甜苷Ⅴ生物合成相关的葡萄糖基转移酶（UDPG）的unigene片段，以罗汉果授粉后70 d的果实RNA为模板，利用RACE和RT-PCR技术克隆UDPG全长基因，将克隆得到的SgUDPG1基因连接到原核表达载体pEASY-E1上，构建融合表达载体，转化到大肠杆菌BL21（DE3），通过IPTG诱导表达，重组蛋白纯化，SDS-PAGE检测表达产物以及Western-blotting和质谱鉴定蛋白产物。结果表明，获得了1条SgUDPG1，全长为1 959 bp，开放阅读框ORF为1 365 bp，编码1条454 aa的肽链，理论分子量为51.2 kD，等电点为5.39，具有植物中次生代谢产物糖基转移酶特有的保守结构域PSPG-box motif。SgUDPG1在授粉后50 d和70 d的果实中表达逐渐升高，是对照授粉后3 d的5.16倍和13.12倍，与果实中甜苷Ⅴ含量呈相同趋势。此基因的ORF可以在大肠杆菌中表达，并且可以纯化出比理论分子量大5.3 kD的融合蛋白，通过Western-blotting和质谱鉴定，确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶。
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| 关 键 词： | 罗汉果 葡萄糖基转移酶 RACE 原核表达 融合蛋白 |
| 收稿时间： | 2013-01-14 |
Cloning and Prokaryotic Expression of UDP-glycosyltransferase in Siraitia grosvenorii |
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| XING Ai-jia,MA Xiao-jun,,MO Chang-ming,PAN Li-mei,WEI Peng-xiao,TANG Chun-feng,TANG Qi,.Cloning and Prokaryotic Expression of UDP-glycosyltransferase in Siraitia grosvenorii[J].Acta Horticulturae Sinica,2013,40(6):1195. |
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| Authors: | XING Ai-jia MA Xiao-jun MO Chang-ming PAN Li-mei WEI Peng-xiao TANG Chun-feng TANG Qi |
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| Institution: | （1Agricultural College of Guangxi University，Nanning 530004，China；2Institute of Medicinal Plant Development，China Academy Medicinal Science，Chinese Peking Union Medical College，Beijing 100193，China；3Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plant，Nanning 530023，China；4Key Laboratory of Guangxi Medicinal Resource Conservation and Genetic Improvement，Nanning 530023，China） |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Siraitia grosvenorii UDP-glycosyltransferase rapid amplification of cDNA ends prokaryotic expression fusion protein |
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