枫香树DNA提取及SRAP-PCR反应体系的建立与优化 |
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引用本文: | 李芳芳,杨少宗,柳新红,李海波,王丽玲,李永华.枫香树DNA提取及SRAP-PCR反应体系的建立与优化[J].河南农业大学学报,2015(1):46-51,67. |
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作者姓名: | 李芳芳 杨少宗 柳新红 李海波 王丽玲 李永华 |
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作者单位: | 河南农业大学;浙江省林业科学研究院 |
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基金项目: | 林业公益性行业科研项目(201404312);浙江省重大科技项目(2012C12908-14);浙江省重大科技项目(2012C12909-21) |
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摘 要: | 通过不同处理的枫香树叶片及基因组DNA提取方法的对比,并采用L16(45)正交试验设计,对影响SRAP-PCR反应体系的Mg2+,d NTPs,引物浓度及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量等5个因素进行优化,确立枫香树SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明,改良CTAB法提取枫香树基因组DNA的产率和纯度均可满足下游试验需要。SRAP-PCR最优反应体系为:总体积20μL,含1×PCR Buffer,1.5 mmol·L-1Mg2+,0.16mmol·L-1d NTPs,0.5μmol·L-1引物,0.9 U Taq DNA聚合酶和40 ng模板DNA。各因素对反应结果的影响大小顺序为Taq DNA聚合酶量d NTPs浓度Mg2+浓度模板DNA用量引物浓度。运用优化的SRAPPCR反应体系对10个不同居群的枫香树基因组DNA扩增检测,结果均能获得稳定性高、多态性丰富和重复性好的条带图谱。
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关 键 词: | 枫香树 DNA提取 SRAP-PCR 正交试验设计 反应体系优化 |
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