| 利用CRISPR/Cas9系统构建可诱导型猪Sohlh1基因敲除细胞系 |
| |
| 引用本文： | 乔延召,刘凯,李清华,黄建豪,卫恒习,张守全.利用CRISPR/Cas9系统构建可诱导型猪Sohlh1基因敲除细胞系[J].华南农业大学学报,2021,42(2):1-8. |
| |
| 作者姓名： | 乔延召 刘凯 李清华 黄建豪 卫恒习 张守全 |
| |
| 作者单位： | 华南农业大学 动物科学学院/国家生猪种业工程技术研究中心，广东 广州 510642;汕尾宝山猪场有限公司，广东 汕尾 516600 |
| |
| 基金项目： | 国家重点研发计划(2017YFD0501902，2018YFD0501001)；广东省现代农业产业技术体系(2016LM1102) |
| |
| 摘 要： | 目的 将Tet-on系统与CRISPR/Cas9系统相结合建立诱导敲除猪Sohlh1基因的细胞系。方法 分离培养猪胎儿成纤维细胞(PFF)，进行慢病毒载体PCW-eSpCas9(1.1)侵染并通过1 μg/mL嘌呤霉素筛选及强力霉素(Dox)诱导；改造pLV-sgRNA载体，进行293FT细胞转染验证；构建含Sohlh1基因目标靶点的pLV-sgRNA-2A-GFP特异性载体，进行慢病毒包装检测；利用包装病毒侵染稳转PCW-eSpCas9(1.1)的PFF细胞，3 μg/mL灭稻瘟菌素进行筛选，随后添加Dox诱导进行表达分析和敲除效率检测。结果 建立了受Dox调控可诱导eSpCas9(1.1)蛋白表达的PFF细胞系，不添加Dox，eSpCas9(1.1)蛋白不表达；293FT细胞表达绿色荧光，表明pLV-sgRNA-2A-GFP载体改造成功。3、4、6号Sohlh1基因靶点具有敲除活性，利用最优的2个靶点构建了pLV-sgRNA-2A-GFP特异性载体，荧光表达显示载体慢病毒包装成功。构建稳转PCW-eSpCas9(1.1)和pLV-sgRNA-2A-GFP的PFF，经Dox诱导72 h后，Sohlh1基因的敲除效率为85%。结论 利用Tet-on系统和CRISPR/Cas9系统成功构建了可诱导型猪Sohlh1基因敲除细胞系，为研究Sohlh1基因的功能以及制备条件性敲除Sohlh1基因去除生殖细胞的模型猪奠定了基础。
|
| 关 键 词： | 猪 Tet-on系统 CRISPR/Cas9系统 Sohlh1 基因敲除 |
| 收稿时间： | 2020/3/16 0:00:00 |
Construction of pig cell line with inducible Sohlh1 gene knockout using CRISPR/Cas9 system |
| |
| QIAO Yanzhao,LIU Kai,LI Qinghu,HUANG Jianhao,WEI Hengxi,ZHANG Shouquan.Construction of pig cell line with inducible Sohlh1 gene knockout using CRISPR/Cas9 system[J].Journal of South China Agricultural University,2021,42(2):1-8. |
| |
| Authors: | QIAO Yanzhao LIU Kai LI Qinghu HUANG Jianhao WEI Hengxi ZHANG Shouquan |
| |
| Institution: | College of Animal Science, South China Agricultural University/National Engineering Research Center for Breeding Swine Industry, Guangzhou 510642, China;Shanwei Baoshan Pig Farm Co., Ltd., Shanwei 516600, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | pig Tet-on system CRISPR/Cas9 system Sohlh1 gene knockout |
|
| 点击此处可从《华南农业大学学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《华南农业大学学报》下载免费的PDF全文 |
