| 巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析 |
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| 引用本文： | 孔亚丽,叶伟,李赛妮,朱牧孜,钟国华,章卫民.巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析[J].华南农业大学学报,2020,41(4):82-89. |
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| 作者姓名： | 孔亚丽 叶伟 李赛妮 朱牧孜 钟国华 章卫民 |
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| 作者单位： | 华南农业大学 农学院/ 农业农村部华南作物有害生物综合防治重点实验室/天然农药与化学生物学教育部重点实验室,广东 广州 510642;广东省科学院 广东省微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东 广州 510070;广东省科学院 广东省微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东 广州 510070;华南农业大学 农学院/ 农业农村部华南作物有害生物综合防治重点实验室/天然农药与化学生物学教育部重点实验室,广东 广州 510642 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31600271)；广东省科技计划(2107A020211023)；广州市珠江科技新星项目(201806010080) |
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| 摘 要： | 【目的】从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中克隆proL基因,异源表达ProL蛋白并研究其理化性质,为解析ProL在合成Cytorhizins类新骨架活性化合物途径中的生物学功能奠定基础。【方法】利用PCR技术从C. rhizophorae中克隆proL基因,通过同源重组的方法将proL基因片段插入到pET28a原核表达载体,在大肠埃希菌Escherichia coli中异源表达,使用尿素对ProL蛋白梯度复性,采用SDS-PAGE技术和质谱测序对ProL蛋白进行分析和鉴定,运用生物信息学方法对ProL蛋白的氨基酸序列相似性进行分析,推测其编码蛋白的结构和功能。【结果】克隆得到proL基因的编码序列,开放阅读框全长909 bp,编码303个氨基酸,ProL蛋白分子式为C1495H2320N424O444S13,相对分子质量为33 754.22,原子数为4 696,等电点为5.69,为酸性蛋白。ProL蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式大量表达,尿素梯度复性获得了纯度为98.9%的ProL蛋白。生物信息学分析发现ProL氨基酸序列在已知蛋白中与Aspergillus ibericus XP025570169.1的酰胺水解酶2相似性最高,为59.40%,其三维结构模型中包含8个α-螺旋和8个β-折叠,保守氨基酸序列为207～216位。【结论】ProL蛋白属于酰胺水解酶超家族,预测其为一种新颖蛋白,该蛋白可能在生成高度氧化的二苯甲酮类化合物途径中起水解作用。
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| 关 键 词： | 巴戟天 Cytospora rhizophorae proL基因 克隆 表达 生物信息学 |
| 收稿时间： | 2019/12/17 0:00:00 |
Expression, purification and characterization of ProL protein in the endophytic fungus Cytospora rhizophorae from Morinda officinalis |
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| KONG Yali,YE Wei,LI Saini,ZHU Muzi,ZHONG Guohu,ZHANG Weimin.Expression, purification and characterization of ProL protein in the endophytic fungus Cytospora rhizophorae from Morinda officinalis[J].Journal of South China Agricultural University,2020,41(4):82-89. |
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| Authors: | KONG Yali YE Wei LI Saini ZHU Muzi ZHONG Guohu ZHANG Weimin |
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| Institution: | College of Agriculture, South China Agricultural University/Key Laboratory of Crop Integrated Pest Management in South China, Ministry of Agriculture and Rural Affairs/ Key Laboratory of Natural Pesticide and Chemical Biology, Ministry of Education, Guangzhou 510642, China;Guangdong Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences/State Key Laboratory of Applied Microbiology Southern China/ Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application/ Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology, Guangzhou 510070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Morinda officinalis Cytospora rhizophorae proL gene cloning expression bioinformatic |
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