基质金属蛋白酶-7的基因克隆和原核表达

研究构建人基质金属蛋白酶7(MMP-7)的原核表达载体,并进行原核表达获得重组蛋白MMP-7。以人肾肿瘤组织总RNA为模板,PCR方法获得MMP-7成熟蛋白的基因序列,构建含10xhis标签的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白,并经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),检测其表达情况。最终得到pET24a(+)-MMP-7-10his重组质粒,诱导表达后重组蛋白占总蛋白的41%左右,获得21.2kD大小蛋白,与目的蛋白大小一致,纯度大于90%,为进一步研究奠定基础。