猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株 ORF3的克隆及原核表达 |
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引用本文: | 郑鸣,李华玮,边传周,王永芬,王老七.猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株 ORF3的克隆及原核表达[J].河南农业科学,2014(10). |
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作者姓名: | 郑鸣 李华玮 边传周 王永芬 王老七 |
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作者单位: | 河南牧业经济学院,河南 郑州,450011 |
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基金项目: | 河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目 |
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摘 要: | 为获得猪圆环病毒Ⅱ型 ORF3编码蛋白,研究该蛋白的特性及功能,根据 GenBank 数据库中PCVⅡ的基因组序列设计引物,利用 PCR 从病料基因组 DNA 中扩增 PCVⅡ河南地方株 ORF3,将其克隆至表达载体 pET 32a 中进行诱导表达,SDS PAGE 电泳检测重组蛋白表达情况,采用 Ni+NTA 亲和纯化表达产物,透析复性后免疫日本大白兔制备多抗血清,并采用 ELISA 和 Western blot方法检测多抗血清的效价和特异性。结果显示,PCR 扩增获得全长315 bp 的 ORF3,重组质粒经测序和双酶切证实构建正确;SDS PAGE 结果显示,ORF3能够在大肠杆菌中表达,产物的分子量约为30 ku,以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白具有较好的抗原性,制备的多抗血清抗体效价达1∶12800以上,抗体特异性高,能与表达的 ORF3编码蛋白结合。成功克隆了 PCVⅡ河南地方株 ORF3并实现原核表达,获得纯化的重组 ORF3编码蛋白。
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关 键 词: | 猪圆环病毒Ⅱ型 ORF3 原核表达 多抗血清 |
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