猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 |
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引用本文: | 李鸽,刘肖,李青梅,杨艳艳,王彦红,张改平.猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J].河南农业科学,2019,48(8). |
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作者姓名: | 李鸽 刘肖 李青梅 杨艳艳 王彦红 张改平 |
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作者单位: | 河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州,450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州,450002;河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州225009 |
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摘 要: | 为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10~(-6)、1×10~(-6)和1×10~(-5)。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Western blot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56 ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIV NP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。
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关 键 词: | 猪流感病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 NP蛋白 单克隆抗体 |
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