| 1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法 |
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| 引用本文： | 张扬,黄维峰,周菲,林拥军.1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法[J].华中农业大学学报,2020,39(3):9-18. |
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| 作者姓名： | 张扬 黄维峰 周菲 林拥军 |
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| 作者单位： | 华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室,武汉 430070;华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室,武汉 430070;华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室,武汉 430070;华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室,武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家重大科技专项（2016ZX08001-001） |
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| 摘 要： | 基于Golden Gate载体构建过程,对CRISPR/Cas9双靶点敲除技术的载体构建系统进行了优化,建立了一种简单快速高效且无PCR扩增的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法。在本方法中,只需将设计好的2个靶点DNA小片段和1个外源片段用T4DNA连接酶构建到CRISPR/Cas9载体上即可。用本方法对10个已报道的水稻基因构建了20个双靶点CRISPR/Cas9载体,阳性率为100%,测序结果显示无突变。该载体系统非常适合大批量CRISPR/Cas9载体的构建,同时也为其他植物中构建双靶点CRISPR/Cas9载体提供借鉴。
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| 关 键 词： | 水稻 CRISPR/Cas9 基因敲除 基因编辑 双靶点 载体构建 |
| 收稿时间： | 2019/5/14 0:00:00 |
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