| 无乳链球菌分选酶A的表达、纯化与活性检测 |
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| 引用本文： | 张露珊,董靖,周顺,刘永涛,胥宁,杨秋红,艾晓辉.无乳链球菌分选酶A的表达、纯化与活性检测[J].华中农业大学学报,2020,39(4):99-104. |
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| 作者姓名： | 张露珊 董靖 周顺 刘永涛 胥宁 杨秋红 艾晓辉 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;中国水产科学研究院长江水产研究所,武汉 430223;中国水产科学研究院长江水产研究所,武汉 430223 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2019YFD0900104）； 国家自然科学基金项目（31702368） |
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| 摘 要： | 以提取的无乳链球菌ATCC51487菌株全基因组为模板,通过PCR扩增出srtA_(ΔN82)基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切、抗性筛选等方法构建重组表达载体,测定不同诱导温度、诱导剂浓度及诱导时间对表达产物的影响,利用亲和层析和离子交换层析纯化蛋白,并使用荧光共振能量转移法测定蛋白活性。结果显示,试验构建的pGEX-6p-1-srtA_(ΔN82)载体转化至BL21(DE3)后,在37℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导表达6 h后可得到大量的可溶性蛋白,且纯度大于85%。纯化后的SrtA_(ΔN82)与底物作用后,可显著提高反应体系的荧光强度,表明得到的SrtA_(ΔN82)具有较好的生物学活性。
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| 关 键 词： | 无乳链球菌 分选酶A 催化活性 靶标 荧光共振能量转移 活性检测 |
| 收稿时间： | 2019/8/27 0:00:00 |
Expression,purification and characteristics of sortase A from Streptococcus agalactiae |
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| ZHANG Lushan,DONG Jing,ZHOU Shun,LIU Yongtao,XU Ning,YANG Qiuhong,AI Xiaohui.Expression,purification and characteristics of sortase A from Streptococcus agalactiae[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2020,39(4):99-104. |
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| Authors: | ZHANG Lushan DONG Jing ZHOU Shun LIU Yongtao XU Ning YANG Qiuhong AI Xiaohui |
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