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| 烟草环斑病毒外壳蛋白基因片段原核表达载体的构建及表达 | |
| 引用本文： | 乔艳艳,杨翠云,于翠,曹洁,马青,张丽莉.烟草环斑病毒外壳蛋白基因片段原核表达载体的构建及表达[J].华中农业大学学报,2008,27(3). |
| 作者姓名： | 乔艳艳 杨翠云 于翠 曹洁 马青 张丽莉 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学植保学院/陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100 2. 上海出入境检验检疫局,上海,200135 3. 第二军医大学微生物学教研室,上海,200433 |
| 基金项目： | 上海市科委科技计划 , 教育部长江学者和创新团队发展计划 , 高等学校学科创新引智计划 |
| 摘 要： | 根据烟草环斑病毒外壳蛋白(TRSV-CP)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,获得烟草环斑病毒基因组中编码外壳蛋白部分基因片段,将其插入原核表达载体pET28a中,获得重组表达质粒pET-CP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导蛋白大量表达.重组蛋白经过Ni -NTA纯化后,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,TRSV-CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子质量约为34ku,并具有免疫学活性.以纯化的表达蛋白免疫新西兰大白兔,多抗血清效价达1:409600,可以与重组蛋白发生抗原抗体反应. |
| 关 键 词： | 烟草环斑病毒(TRSV) RT-PCR 原核表达 融合蛋白 |
Construction of Prokaryotic Vector and Expression of the CP Fragment of Tobacco ringspot virus |
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| QIAO Yan-yan,YANG Cui-yun,YU Cui,CAO Jie,MA Qing,ZHANG Li-li.Construction of Prokaryotic Vector and Expression of the CP Fragment of Tobacco ringspot virus[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2008,27(3). | |
| Authors: | QIAO Yan-yan YANG Cui-yun YU Cui CAO Jie MA Qing ZHANG Li-li |
| Abstract: | The CP fragment of the Tobacco ringspot virus(TRSV) was amplified by RT-PCR,and inserted into the expression vector pET28a.The recombinant plasmid pET-CP was transformed into Escherichia coli BL21(DE3),the target protein was expressed with induction of IPTG and purified by Ni+-NTA metal chelation chromatography.The purified recombinant protein was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting,the results showed that the CP fragment was highly expressed.The molecular weight of the recombinant protein was about 3... |
| Keywords: | Tobacco ringspot virus RT-PCR prokaryotic expression recombinant protein |
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