| 产酸克雷伯氏菌游动性减弱突变体的筛选 |
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| 引用本文： | 江绍锋,黄金清,于晓宇,李云飞,蓝运华,陆祖军.产酸克雷伯氏菌游动性减弱突变体的筛选[J].华中农业大学学报,2017,36(1):68-75. |
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| 作者姓名： | 江绍锋 黄金清 于晓宇 李云飞 蓝运华 陆祖军 |
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| 作者单位： | 广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室,桂林 541004;广西高校野生动植物生态学重点实验室,桂林 541004; 3.华南农业大学农学院,广州 510642,广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室,桂林 541004;,广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室,桂林 541004;,广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室,桂林 541004;,广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室,桂林 541004;,广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室,桂林 541004; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31060120); 广西壮族自治区自然科学基金项目(2013GXNSFAA019059); 广西研究生教育创新计划项目(YCSZ2014090) |
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| 摘 要： | 以产酸克雷伯氏菌KO108为研究对象,通过构建转座子突变体文库,筛选获得2株游动性显著降低的突变菌株,并以转座子mTn5gusA-pgfp21构建突变体库,利用地高辛生物标记gfp基因序列作为探针,Southern杂交验证突变体库的质量,根据杂交条带判断mTn5gusA-pgfp21转座子插入染色体的拷贝数,以反向PCR获取未知序列,通过基因组学分析预测游动性相关基因。结果表明:产酸克雷伯氏菌KO108具Kan抗性标记、GUS活性、GFP遗传标记的突变体库可由两亲结合经转座子mTn5gusA-pgfp21转座突变获得;随机选择100株突变体进行游动性筛选,仅获得2株游动性显著降低的目标菌株MA和MD;MA、MD与KO108差异显著(P0.05),而MA和MD之间没有显著差异;Southern杂交结果显示MA和MD的转座子mTn5gusApgfp21为单插入,且插入位点所在的酶切片段大小不同;经反向PCR、测序、序列分析,发现MA突变基因为醌类氧化还原酶(NAD(P)H:quinone oxidoreductase)(NQR)基因簇的NqrA,MD突变基因为LPS脂多糖生物合成基因簇基因;生长曲线检测显示KO108和MA、MD无显著差异;菌膜检测发现MD与KO108、MA有一定差异,但KO108与MA之间无显著性差异;以Biolog ECO检测KO108和MA、MD的碳源利用情况,结果表明MA和MD 72h后仍然不能利用羧酸类碳源D-半乳糖酸γ-内酯和2-羟基苯甲酸。
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| 关 键 词： | 酸克雷伯氏菌 Tn5插入突变 突变体 游动性 |
| 收稿时间： | 2016/1/22 0:00:00 |
Screening for motility reduction mutants of Klebsiella oxytoca |
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