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CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定
引用本文:陈济,潘巍巍,魏丽丽,袁成福,易发平,卜友泉,宋方洲.CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定[J].西南农业大学学报,2008,30(1):69-74.
作者姓名:陈济  潘巍巍  魏丽丽  袁成福  易发平  卜友泉  宋方洲
作者单位:重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室,临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆400016
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No:30371479)
摘    要:根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797~+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.

关 键 词:RNA干扰  细胞周期蛋白E  HeLa细胞  细胞周期
文章编号:1673-9868(2008)01-0069-06
收稿时间:2007-10-15
修稿时间:2007年10月15

Construction of siRNA Eukaryotic Vector of Cyclin E Gene and Preliminary Identification of Its Interference Efficiency
CHEN Ji, PAN Wei-wei, WEI Li-li,YUAN Cheng-fu, YI Fa-ping, BU You-quan, SONG Fang-zhou.Construction of siRNA Eukaryotic Vector of Cyclin E Gene and Preliminary Identification of Its Interference Efficiency[J].Journal of Southwest Agricultural University,2008,30(1):69-74.
Authors:CHEN Ji  PAN Wei-wei  WEI Li-li  YUAN Cheng-fu  YI Fa-ping  BU You-quan  SONG Fang-zhou
Abstract:
Keywords:RNA interference  cyclin E  HeLa cell  cell cycle
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