齿兰环斑病毒RT-qPCR检测方法的建立

【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)建立快速、有效检测方法，对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料，根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein, cp)基因序列分析其序列保守区，使用Primer Premier 5.0设计反转录荧光定量PCR引物及TaqMan荧光探针，建立检测齿兰环斑病毒的一步法RT-qPCR。构建齿兰环斑病毒cp基因克隆质粒，并以该质粒作为标准品进行荧光定量PCR标准曲线测定；以齿兰环斑病毒、建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)的病毒RNA为模板进行一步法RT-qPCR特异性检测；以10倍倍比稀释的cp基因质粒为模板进行灵敏性检测；用该法对大田18个兰花样品进行齿兰环斑病毒感染情况监测。【结果】齿兰环斑病毒一步法RT-qPCR检测法仅检出齿兰环斑病毒阳性模板，其余模板检测结果为阴性，说明检测方法具有特异性；该方法能够检测到的齿兰环斑病毒cp基因最低拷贝数...