马氏珠母贝GAPDH基因克隆及其在去甲基化受精卵中的表达分析

利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,克隆了马氏珠母贝(Pinctada fucata)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因的全长cDNA序列。GAPDH基因cDNA全长为1 174 bp(Gen Bank登录号:KX129947.1),其开放阅读框长度为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质分子量为36.04 ku,理论等电点7.66,无信号肽。蛋白质亚细胞定位显示GAPDH蛋白分布在细胞质中的可能性最大(69.6%)。该蛋白具有1个甘油醛-3-磷酸脱氢酶NAD结构域以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶C末端结构域。系统进化分析表明,GAPDH在亲缘关系上与同为软体动物门的厚壳玉黍螺最近,与其动物学分类地位一致。荧光定量PCR分析显示,经去甲基化试剂5-氮杂胞苷处理后的受精卵GAPDH基因表达水平显著上升(P0.05)。