烟草叶肉原生质体再生植株的研究

烟草原生质体是以烟草叶片薄壁细胞为材料，在无菌条件下，用2％纤维素酶（Onozuka-R10)0.5%离析酶（Macerozyme R-10),0.2%葡聚糖硫酸钾，5mN氯化钙，1mM磷酸二氢钾，0．7M甘露醇，PH5．8；或0．75％纤维素酶（EA3 876），0．3％离析酶，0．3％葡聚糖硫酸钾，0．7M甘露醇，PH5．6的沸合酶液，降解细胞壁分离出来的，并在NT（提高了氯化钙，VB1含量和降低硫酸镁含量以及增添了烟酸和维生素B6）液体培养基中培养，2天后发生细胞壁再生，3－4天后出现再生细胞的第一次分裂，5－7天第二次分裂，14天后可见15－20个细胞组成的小细胞团，此时要改变碳源和降低渗透浓度，30－40天后形成40－50个细胞组成的细胞团，大的细胞团约达1毫米，转移至固体分化培养基，随后进一步分化出小苗，将具有4－5片叶片，3－4厘米高的小苗 转移到生根培养基，发育成完整的小植株。