| 冬瓜均一化酵母双杂交 cDNA 文库的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 陈 凤,闫晋强,李梅兰,江 彪.冬瓜均一化酵母双杂交 cDNA 文库的构建及鉴定[J].广东农业科学,2021,48(8):58-64. |
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| 作者姓名： | 陈 凤 闫晋强 李梅兰 江 彪 |
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| 作者单位： | 1. 山西农业大学园艺学院，山西 晋中 030801；
2. 广东省农业科学院蔬菜研究所 / 广东省蔬菜新技术研究重点实验室，广东 广州 510640 |
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| 基金项目： | 广东省重点领域研发计划项目（2020B020220003）；广东省基础与应用基础研究基金 - 粤穗联合基金（2020A1515111138）；广东省农业科学院科技创新战略专项资金（高水平农科院建设）- 人才项目（R2020PYJG003）；广东省蔬菜新技术研究重点实验室开放基金（201902） |
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| 摘 要： | 【目的】通过构建冬瓜酵母双杂交cDNA文库,为开展冬瓜基因功能研究提供技术支撑。【方法】以冬瓜高代自交系B227(冬瓜参考基因组测序材料)的根、茎、叶、雄花、嫩果等不同组织为材料,利用CTAB法提取RNA、分离纯化获得mRNA并进行双链cDNA合成和DSN均一化处理后,与pDONR222载体进行BP重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建初级文库;提取初级文库质粒,与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建酵母杂交cDNA次级文库。利用倍比稀释法计算文库库容量,并通过菌落PCR计算文库重组率和插入片段的大小。【结果】初级文库库容量为8.24×106 CFU,冬瓜均一化酵母双杂交次级cDNA文库库容量为1.03×107 CFU;次级文库中插入片段主要集中在850～3 000 bp,重组率为100%,具有良好的多态性。【结论】成功构建了冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库,文库完整性较高、质量较好,符合酵母双杂交实验要求,可应用于后续相关基因产物互作蛋白的筛选等试验,为冬瓜基因功能研究提供前提条件。
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| 关 键 词： | 冬瓜 DSN 均一化 cDNA 文库 酵母文库 |
Construction and Identification of a Homogenized Yeast Two-hybrid cDNA Library in Benincasa hispida |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | wax gourd DSNhomogenization cDNA library yeast library |
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