| 利用CRISPR/Cas9技术构建猪的LDLR基因敲除细胞 |
| |
| 引用本文： | 韩佃刚,胡娟,董俊,周思佳,陈朝林,张家翔,信吉阁.利用CRISPR/Cas9技术构建猪的LDLR基因敲除细胞[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2023,49(4):468-471. |
| |
| 作者姓名： | 韩佃刚 胡娟 董俊 周思佳 陈朝林 张家翔 信吉阁 |
| |
| 作者单位： | 1.云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 650201；2.昆明海关技术中心，云南 昆明 650200；3.云南农业大学动物医学院，云南 昆明 650201 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31960658、31360532)；云南省科技计划项目(2013FB041) |
| |
| 摘 要： | 利用CRISPR/Cas9系统构建猪的低密度脂蛋白受体基因LDLR敲除细胞：根据NCBI数据库猪LDLR基因(Gene ID为396801)序列设计sg RNA靶位点，构建敲除打靶载体，通过电转染猪胎儿成纤维细胞，经G418筛选获得细胞克隆，进行PCR扩增和T载体克隆测序，经序列比对计算基因敲除效率。结果表明，依照CRISPR/Cas9系统GN20GG法则，在LDLR基因第一外显子上设计1条sg RNA，测序结果显示靶序列已正确连接，转染、筛选后共获得30个单细胞克隆，23个测序成功，其中有7个细胞克隆为LDLR基因敲除细胞克隆，敲除效率为30.4%。
|
| 关 键 词： | 猪 低密度脂蛋白受体基因 基因敲除 CRISPR/Cas9系统 |
|
| 点击此处可从《湖南农业大学学报(自然科学版)》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《湖南农业大学学报(自然科学版)》下载免费的PDF全文 |
