沙芥幼苗叶片小热激蛋白基因的克隆与表达

在对转录组和蛋白组数据联合分析的基础上，通过RT–PCR方法克隆得到沙芥幼苗叶片2个小分子热激蛋白基因PcHSP26.5和PcHSP17.8，运用生物信息学软件分析它们的核苷酸和编码蛋白，通过Real–time PCR分析其在高温、低温、NaCl、ABA和干旱复水胁迫下的表达模式。PcHSP26.5和PcHSP17.8开放阅读框分别为699 bp和462 bp，分别编码282和153个氨基酸，其中PcHSP26.5包含1个内含子。PcHSP26.5、PcHSP17.8的相对分子质量分别为26 480、17 490，理论等电点分别为6.36、5.99；均无跨膜结构与信号肽位点，属于亲水蛋白。亚细胞定位预测和进化树分析表明，PcHSP26.5主要定位于线粒体中，属于MⅡ亚族；PcHSP17.8主要定位于细胞质中，属于CⅠ亚族。实时荧光定量PCR结果表明：高温胁迫下，沙芥PcHSP26.5和PcHSP17.8基因的相对表达量均在1 h达到顶峰，之后下降；低温胁迫下，沙芥PcHSP26.5基因的相对表达量在0.5 h达到顶峰，之后下降，沙芥PcHSP17.8基因的相对表达量在0.5~12 h内低于对照，24 h时出现上升趋势；NaCl胁迫下，沙芥PcHSP26.5和PcHSP17.8基因的相对表达量分别在 1 h和3 h达到顶峰，之后下降；ABA胁迫下，沙芥PcHSP26.5和PcHSP17.8基因的相对表达量均在2 h达到顶峰，之后下降；干旱复水胁迫下，沙芥PcHSP26.5和PcHSP17.8基因的相对表达量均在干旱9 d达到顶峰，复水后下降。