TaqMan–MGB探针荧光定量PCR检测致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌 |
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引用本文: | 童桂香,黎小正,吴祥庆,黄鸾玉,黄光华,韦信贤.TaqMan–MGB探针荧光定量PCR检测致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2019,45(4). |
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作者姓名: | 童桂香 黎小正 吴祥庆 黄鸾玉 黄光华 韦信贤 |
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作者单位: | 广西水产科学研究院;广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室 |
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基金项目: | 广西水产畜牧科技推广应用项目(桂渔牧科201633022);广西创新驱动发展专项(桂科AA17204081–4);广西自然科学基金项目(2015GXNSFBA139069);广西壮族自治区直属公益性科研院所基本科研业务费专项(GXIF–2016–10);广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室项目(17–259–29) |
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摘 要: | 根据pir AVp基因保守序列设计特异性引物和TaqMan–MGB探针,经优化反应体系及条件,建立检测致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的TaqMan–MGB探针荧光定量PCR方法;以重组质粒为标准品制作标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。结果表明:该方法定量范围宽,起始模板浓度范围为1×101~1×109拷贝/反应时,标准曲线具良好的线性关系;最低检测限约为10拷贝/反应,与对虾其他病原菌及病毒无交叉反应,重复试验变异系数为0.37%~0.47%,可在1 h内完成单个样品检测;对临床对虾样品及水样的检测结果表明,与世界动物卫生组织(OIE)推荐的套式PCR法相比,可提高VpAHPND的阳性检出率,且检测为阳性的样品包含全部套式PCR法检测为阳性的样品。可见,应用TaqMan–MGB探针建立的检测VpAHPND的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、能快速定量等优点,可用于临床对虾样品及水样的VpAHPND检测。
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关 键 词: | 对虾 急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 TaqMan–MGB探针 荧光定量PCR方法 |
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