| 猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 刘建杰,何启盖,陈焕春,吴斌,徐晓娟,刘军发,唐先春,贝为成.猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立[J].中国农业科学,2004,37(1):148-151. |
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| 作者姓名： | 刘建杰 何启盖 陈焕春 吴斌 徐晓娟 刘军发 唐先春 贝为成 |
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| 作者单位： | 华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30200011)和湖北省重点科技攻关资助项目(2001AA201B02) |
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| 摘 要： | 根据胸膜肺炎放线杆菌S4074菌株毒素Ⅰ的序列,设计了1对引物,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ的结构基因(aoxICA),扩增的DNA片段大小为3 640 bp(4 687～8 326 bp),将其克隆到pMD18-T载体中,酶切鉴定和序列测定后,进一步将其插入pET-28a中构建了原核表达载体,SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,而且表达的蛋白质具有免疫学活性.利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板,建立了检测毒素Ⅰ血清抗体的ELISA方法.临床应用表明,该方法可用于APP强毒株感染的检测.
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| 关 键 词： | 猪胸膜肺炎放线杆菌 apxICA基因 克隆 原核表达 ELISA |
| 修稿时间： | 2002年11月8日 |
Cloning, Expression and Establishment of the ELISA Detection Method of the apxICA Gene of Actinobacillus pleuropneumoniae |
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