| 家蚕酸吡哆醇氧化酶cDNA克隆、鉴定及基因结构分析 |
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| 引用本文： | 张剑韵,石瑞君,黄硕豪,黄龙全.家蚕酸吡哆醇氧化酶cDNA克隆、鉴定及基因结构分析[J].中国农业科学,2008,41(11). |
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| 作者姓名： | 张剑韵 石瑞君 黄硕豪 黄龙全 |
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| 基金项目： | 安徽省教育厅自然科学研究项目
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国家自然科学基金资助项目
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| 摘 要： | 目的]了解家蚕维生素B6关键代谢酶磷酸吡哆醇氧化酶(PNP0)的基因结构.方法]利用生物信息学原理和PeR方法,克隆出编码家蚕(Bombyx mori)PNPO的cDNA(GenBank登录号:DQ452398);采用T7启动子/T7 RNA聚合酶原核表达系统对cDNA进行体外表达,并通过酶活检测进行表达产物的功能鉴定;依据家蚕基因组数据库信息和得到的cDNA,对家蚕PNPO基因结构进行分析.结果]克隆到的cDNA含有771 bp的完整可读框,编码一条分子量为29.86 kD、含257个氨基酸残基的蛋白质.序列比对显示此蛋白质与人类PNPO具有51.44%的同源性,包含PNPO家族共有的保守序列,但在人和大肠杆菌PNPO中具有重要作用的几个氨基酸残基在此蛋白质中被替换.在以磷酸吡哆醇(PNP)为底物时,表达产物Pro-PNPO的酶活力约为17 nmol·min-1·mg-1.家蚕PNPO基因包含5个外显子和4个内含子,跨越3.5 kb DNA序列,所有外显子/内含子交接点都遵从gt/ag剪接规则,基因的5'端启动子调控区发现有TATA-box和CAAT-box保守基序.结论]获得家蚕PNPO基因,可利用该基因在分子水平上研究家蚕的VB6代谢特征,弄清PNPO家族的特征及其在生物进化过程中的演变规律.
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| 关 键 词： | 家蚕 磷酸吡哆醇氧化酶 cDNA克隆 酶活力 基因结构分析 |
Cloning,Identification and Genomic Organization of the cDNA Encoding Pyridoxine 5'-phosphate Oxidase in Bombyx mori |
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