LeWRKY2基因的克隆及功能分析

【目的】克隆番茄WRKY2转录因子，为研究番茄抗病反应的分子机理和分子育种奠定基础。【方法】根据克隆出的番茄LeWRKY2基因特异片段（GenBank登录号：EU755368.1），运用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cNDA ends，RACE）技术克隆番茄LeWRKY2 cDNA全长，并用生物信息学的方法对其进行分析。用实时荧光定量PCR方法检测番茄经JA、番茄灰霉菌（Botrytis cinerea）、放线菌酮（cycloheximide）刺激时LeWRKY2基因的表达情况。【结果】①从番茄中克隆到一条全长为1 007 bp的cDNA序列，命名为LeWRKY2基因，阅读框471 bp，编码156个氨基酸。②LeWRKY2蛋白含有1个WRKY结构域和1个C2H2型锌指结构，可能具有转录、转录调控、信号传导功能。③100 μmol?L-1 茉莉酸（jasmonic acid，JA）刺激番茄幼苗0-60 min时，LeWRKY2基因的相对含量与JA刺激时间成正比；而刺激60-150 min时，LeWRKY2基因的相对含量与JA刺激时间成反比；④番茄灰霉菌可以诱导LeWRKY2基因的的表达，且在4 h时表达量达到最高；⑤LeWRKY2基因的转录产物的合成不依赖于蛋白质的从头合成。【结论】LeWRKY2是一种参与番茄防御反应的早期快速反应基因。

Molecular Cloning and Analysis of LeWRKY2 Gene