| 猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析 |
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| 引用本文： | 刘振勇,吕志慧,郑亚东,窦永喜,乔军,骆学农,张艳,景志忠,才学鹏.猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析[J].中国农业科学,2010,43(1):192-199. |
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| 作者姓名： | 刘振勇 吕志慧 郑亚东 窦永喜 乔军 骆学农 张艳 景志忠 才学鹏 |
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| 作者单位： | （中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室）; |
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| 基金项目： | 基本科研业务费专项资金项目，国家科技支撑计划 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。
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| 关 键 词： | dUTP焦磷酸酶 猪囊尾蚴 原核表达 酶学活性 |
| 收稿时间： | 2008-04-14; |
Cloning,Expression of Cysticercus Cellulosae dUTPase and the Determination of Its Enzymatic Activity |
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| LIU Zhen-yong,LV Zhi-hui,ZHENG Ya-dong,DOU Yong-xi,QIAO Jun,LUO Xue-nong,ZHANG Yan,JING Zhi-zhong,CAI Xue-peng.Cloning,Expression of Cysticercus Cellulosae dUTPase and the Determination of Its Enzymatic Activity[J].Scientia Agricultura Sinica,2010,43(1):192-199. |
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| Authors: | LIU Zhen-yong LV Zhi-hui ZHENG Ya-dong DOU Yong-xi QIAO Jun LUO Xue-nong ZHANG Yan JING Zhi-zhong CAI Xue-peng |
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| Institution: | (Key Laboratory of Veternary Parasitology of Gansu Province / State Key Laboratory of Veterinary Etiological Lanzhou Veterinary Research Institude/Key Laboratory of Veterinary Public Health of Ministry of Agriculture/Chinese Academy of Agricultural Sciences)
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| Abstract: | |
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| Keywords: | dUTP pyrophosphatase cysticercus cellulose prokaryotic expression enzymatic activity |
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