| 猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救 |
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| 引用本文： | 邹兴启,赵启祖,范运峰,朱元源,王琴,徐璐,范学政,宁宜宝.猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救[J].中国农业科学,2011,44(2):409-416. |
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| 作者姓名： | 邹兴启 赵启祖 范运峰 朱元源 王琴 徐璐 范学政 宁宜宝 |
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| 作者单位： | (中国兽医药品监察所) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30571377) |
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| 摘 要： | 【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50?mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 C株 感染性克隆构建 拯救方法 传代 |
| 收稿时间： | 2010-04-01; |
Construction of the Full Length Infectious cDNA Clones of CSFV C Strain and Virus Rescue |
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| ZOU Xing-qi,ZHAO Qi-zu,FAN Yun-feng,ZHU Yuan-yuan,WANG Qin,XU Lu,FAN Xue-zheng,NING Yi-bao.Construction of the Full Length Infectious cDNA Clones of CSFV C Strain and Virus Rescue[J].Scientia Agricultura Sinica,2011,44(2):409-416. |
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| Authors: | ZOU Xing-qi ZHAO Qi-zu FAN Yun-feng ZHU Yuan-yuan WANG Qin XU Lu FAN Xue-zheng NING Yi-bao |
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| Institution: | ZOU Xing-qi1,ZHAO Qi-zu1,FAN Yun-feng2,ZHU Yuan-yuan1,WANG Qin1,XU Lu1,FAN Xue-zheng1,NING Yi-bao1(1China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081,2China Animal Disease Control Center,Beijing 100026) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | classic swine fever virus Chinese strain infectious clone construction rescue method passage |
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