烟草中NAC类转录因子基因的克隆及分析

 【目的】克隆烟草NAC类转录因子基因，分析其序列特征和表达特性，为深入研究NAC类转录因子对烟草打顶后根系的生长发育与烟碱生物合成之间的关系奠定基础。【方法】采用电子克隆结合RT-PCR获得烟草NtNAC-R1全长cDNA序列，并进行生物信息学分析，用pRESTB原核表达系统进行该基因的原核表达。分别采用RT-PCR和Northern杂交对烟草打顶前、后根尖组织中NtNAC-R1的表达模式进行分析。【结果】烟草NtNAC-R1开放性阅读框架长度为936 bp，编码311个氨基酸，具有NAC转录因子家族典型的保守结构域。系统进化分析表明，该基因与矮牵牛NAC亲缘关系较近，属茄科植物特异NAC家族，在原核细胞中具有表达活性。该基因在烟草根中的表达水平最高，在烟草打顶后2—4 h表达水平下降，随后上升。【结论】从烟草根尖组织中克隆了一个NAC转录因子基因NtNAC-R1，该基因在根系中具有高水平表达，在烟草打顶后2—4 h表达水平显著降低，具有响应烟草打顶所导致的信号传递作用。