| 山羊骨骼肌卫星细胞系分离、培养及其成肌诱导分化研究 |
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| 引用本文： | 李伟,郑蒙蒙,邱峰龙,朱才业,韦光辉,王丹,李碧春.山羊骨骼肌卫星细胞系分离、培养及其成肌诱导分化研究[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2013(1):12-17. |
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| 作者姓名： | 李伟 郑蒙蒙 邱峰龙 朱才业 韦光辉 王丹 李碧春 |
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| 作者单位： | 扬州大学动物科学与技术学院 |
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| 基金项目： | 优质转基因肉羊新品种培育项目(2011ZX08008-003);国家高技术研究发展计划项目(863-2011AA100307-04) |
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| 摘 要： | 采用外科手术方法从山羊四肢肌肉或背最长肌获取3mm×3mm肌肉束,置于1mg.mL-1 IV胶原酶中,室温消化30min,分散肌丝,在体视显微镜下分离肌丝;再用0.25%胰酶-EDTA于37℃下消化10min,以释放出骨骼肌卫星细胞(SSC)和其他细胞。连续5代在增殖培养体系(80%DMEM/F12+10%胎牛血清+10%马血清)中采用差速贴壁方法,收集接种后20min的贴壁细胞,对纯化的SSC采用免疫荧光方法检测SSC特异标志蛋白Pax-7,结果表明:(92.5±3.4)%细胞表达Pax-7,(93.0±1.8)%细胞表达MyoD,说明90%以上细胞为SSC。将纯化的SSC细胞分别在诱导培养体系Ⅰ(93%DMEM/F12+1%胎牛血清+1%马血清+1%non-AA)和II(99%Opti-MEM+1%non-AA)中进行诱导培养,通过细胞形态学观察和成肌细胞早期标志蛋白Desmin、MyHC免疫荧光检测诱导效果,结果表明:采用体系Ⅱ能在各种细胞密度(大于1×105个.cm-2)下诱导山羊SSC向成肌方向分化,而采用体系Ⅰ(低血清培养基)且仅当能诱导高密度山羊SSC向成肌方向分化。采用改进的SSC分离方法能够获得较高纯度的卫星细胞,比较诱导体系Ⅰ、Ⅱ认为,诱导培养体系Ⅱ适合于山羊SSC成肌诱导分化,为进一步研究SSC成肌分化机制提供素材。
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| 关 键 词： | 山羊 骨骼肌卫星细胞 细胞培养 成肌诱导分化 |
Isolation,culture and differentiation of goat skeletal satellite cell |
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| LI Wei,ZHENG Mengmeng,QIU Fenglong,ZHU Caiye,WEI Guanghui,WANG Dan,LI Bichun.Isolation,culture and differentiation of goat skeletal satellite cell[J].Journal of Yangzhou University:Agricultural and Life Science Edition,2013(1):12-17. |
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| Authors: | LI Wei ZHENG Mengmeng QIU Fenglong ZHU Caiye WEI Guanghui WANG Dan LI Bichun |
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| Institution: | (Coll of Anim Sci and Tech,Yangzhou Univ,Yangzhou 225009,China) |
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| Abstract: | |
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