牙鲆细胞因子M17蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 |
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引用本文: | 苏玉凤,马倩倩,孙敬锋.牙鲆细胞因子M17蛋白原核表达及其多克隆抗体制备[J].天津农业科学,2023(8):44-48+55. |
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作者姓名: | 苏玉凤 马倩倩 孙敬锋 |
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作者单位: | 天津农学院水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室 |
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摘 要: | M17是鱼类细胞因子IL-6亚族家族的成员之一,具有细胞因子样功能,在鱼体内发挥抗病毒和抗细菌的作用。为了制备牙鲆(Paralichthys olivaceus)M17蛋白的多克隆抗体,将M17基因插入pET-32a原核表达载体,构建M17基因原核表达质粒p ET-32a-M17。将构建的质粒pET-32a-M17转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞,通过IPTG诱导M17蛋白表达,利用NiNTA亲和层析柱纯化M17重组蛋白。利用纯化的重组M17蛋白免疫小鼠获得M17多克隆抗体(抗血清)。结果显示,IPTG诱导后M17蛋白分子质量大小约为50.0 ku,M17重组蛋白主要以包涵体表达为主;Ni-NTA亲和层析柱纯化后透析复性后M17重组蛋白浓度为597μg·mL-1;多克隆抗体经双向琼脂免疫扩散法检测抗体效价为1∶16,经Western blotting分析可见单一目的条带,说明制备的多克隆抗体具有较强的特异性。综上可知,M17重组蛋白表达成功,且制备的抗M17多克隆抗体可用于M17蛋白的生物学功能研究。
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关 键 词: | 牙鲆 M17蛋白 原核表达 重组蛋白 多克隆抗体 |
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