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重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测
引用本文:王文棋,盖颖,陆海,蒋湘宁.重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测[J].北京林业大学学报,2006,28(3):57-60.
作者姓名:王文棋  盖颖  陆海  蒋湘宁
作者单位:1.北京林业大学生物科学与技术学院
基金项目:中国科学院资助项目 , 科技部科研项目
摘    要:为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用, 以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础. 

关 键 词:DNA重组酶Cre    pET30-Cre高效表达    一步纯化    Cre酶活性检测
文章编号:1000-1522(2006)03-0057-04
收稿时间:03 20 2005 12:00AM
修稿时间:2005-03-20

Recombinase Cre's overexpression in Escherichia coli BL21(DE3) and its one-step purification and activity assay
WANG Wen-qi,GAI Ying,LU Hai,JIANG Xiang-ning.Recombinase Cre''''s overexpression in Escherichia coli BL21(DE3) and its one-step purification and activity assay[J].Journal of Beijing Forestry University,2006,28(3):57-60.
Authors:WANG Wen-qi  GAI Ying  LU Hai  JIANG Xiang-ning
Institution:College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P.R. China
Abstract:In order to realize the application of Cre recombinase in vitro,plasmid pTE30-Cre was constructed based on a pET-30a vector.This plasmid was transferred into Escherichia coli BL21(DE3).The Cre gene was overexpressed and then induced by IPTG.The Cre recombinase protein was easily purified using a Ni~ affinity column and its activity was tested in vitro by providing a plasmid which contained two of the same directional loxP sites.
Keywords:DNA recombinase Cre  pET30-Cre overexpression vector  one-step purification  activity assay of Cre
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