| 绵羊成肌细胞的纯化、培养、鉴定及其成肌诱导分化研究 |
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| 引用本文： | 王红娜,张英杰,刘月琴.绵羊成肌细胞的纯化、培养、鉴定及其成肌诱导分化研究[J].河北农业大学学报,2016(1). |
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| 作者姓名： | 王红娜 张英杰 刘月琴 |
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| 作者单位： | 河北农业大学动物科技学院,河北保定,071000 |
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| 基金项目： | 国家现代肉羊产业技术体系建设项目(CARS-39) |
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| 摘 要： | 为建立绵羊成肌细胞体外纯化、培养和鉴定的方法以及对成肌细胞进行成肌诱导分化的初步研究,本试验以绵羊胎儿为材料,采用胶原蛋白酶ⅠA消化分离成肌细胞,分别用Percoll分离液梯度离心和2次差速贴壁法纯化成肌细胞,采用免疫荧光方法检测成肌细胞的特异性标志蛋白Desmin以及RT-PCR鉴定成肌细胞的定型因子Myf5和MyoD1。细胞传至第二代后用CCK-8试剂盒检测细胞生长曲线。利用含2%马血清的培养基进行分化诱导并进行MYH1(Myosin heavy chain 1肌球蛋白重链1)免疫荧光染色。结果显示,梯度离心和差速贴壁法均可获得较高纯度的成肌细胞,纯度均在92%以上。RT-PCR结果显示细胞高表达Myf5和MyoD1。细胞符合正常生长规律,生长曲线近似S形。对成肌细胞进行诱导分化,大部分细胞融合为肌管,成肌特异性标志MYH1表达呈阳性。本研究获得了绵羊成肌细胞分离纯化培养及鉴定的方法、高纯度的绵羊成肌细胞系,为以后利用成肌细胞研究肌肉发育调控机理提供了材料。
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| 关 键 词： | 绵羊 成肌细胞 纯化 成肌诱导分化 |
A study of purification,culture, identification and differentiation of sheep myoblast cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sheep myoblast purification myo-differentition |
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