环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测草鱼呼肠孤病毒方法的建立

将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合建立一种快速检测草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的LAMP-LFD检测方法,并与实时荧光定量PCR(qPCR)技术进行对比。以GCRV S8片段为检测靶标,设计6条特异性引物(FIP/BIP,F3/B3,LF/LB),其中上游引物FIP以生物素(Biotin,BIO)标记,进行LAMP反应条件优化,同时设计1条羟基荧光素(Fluorescein amidite,FAM)标记的探针,用于LAMP反应产物的LFD检测。结果表明:LAMP最佳反应温度为63℃,反应时间40min。从LAMP扩增到LFD结果判读共需50min,比qPCR检测缩短近1h。LAMP-LFD与qPCR均可特异性检出GCRV,针对同一重组质粒的检测,LAMP-LFD的检测限为970fg,qPCR的检测限为97fg,虽然LAMP-LFD的检测灵敏度低于qPCR 10倍,但该方法操作简单,仪器设备依赖性低,可快速、特异地检测出GCRV,有望成为GCRV现场快速检测的常规技术手段。