| HIV VRC01单链抗体的构建、原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 王瑞琴,杨 雄,陈红英.HIV VRC01单链抗体的构建、原核表达及纯化[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2013,41(1):177-182. |
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| 作者姓名： | 王瑞琴 杨 雄 陈红英 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-09-0652);西北农林科技大学人才专项 |
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| 摘 要： | 【目的】合成、克隆HIV单克降抗体VRC01的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。【方法】根据GenBank上公布的VRC01抗体可变区的氨基酸序列合成引物,运用基因从头合成和重叠延伸PCR方法,克隆抗体VRC01的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因;用15肽Linker(Gly4Ser)3将VH和VL基因相连,得到单链抗体基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,并分别将两者克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒后转入大肠杆菌BL21(DE3+)中诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;将重组蛋白进行变性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行初步纯化。【结果】得到了VRC01的2种单链抗体的基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,其大小分别为770和768bp。SDS-PAGE电泳结果显示,scFv-VH-Linker-VL在大肠杆菌中不表达或表达量极低;而scFv-VL-Linker-VH表达量较高,蛋白质分子质量约为29ku,且主要以包涵体形式存在。Western blot检测结果证实,scFv-VL-Linker-VH可与His-Tag融合表达,并通过亲和层析法成功纯化获得了该单链抗体。【结论】成功构建、表达并纯化出了VRC01单链抗体,为进一步研究VRC01单链抗体的生物学特性奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人类免疫缺陷病毒(HIV) 单链抗体 VRC01 重叠PCR 原核表达 纯化 |
| 收稿时间： | 2012/4/28 0:00:00 |
Cloning,prokaryotic expression and purification of single-chain variable fragment(scFv)of antibody VRC01 against HIV-1 |
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| WANG Rui-qin,YANG Xiong,CHEN Hong-ying.Cloning,prokaryotic expression and purification of single-chain variable fragment(scFv)of antibody VRC01 against HIV-1[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2013,41(1):177-182. |
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| Authors: | WANG Rui-qin YANG Xiong CHEN Hong-ying |
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| Institution: | (College of Life Sciences,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HIV single-chain variable fragment of an antibody VRC01 overlap PCR prokaryotic expression purification |
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